• Mai 21, 2022

Polyklonaler Kaninchen-Anti-Phosphothreonin-Antikörper, Biotin

Einführung
Proteinkinasen übertragen Phosphatgruppen von ATP auf Serin-, Threonin- oder Tyrosinreste auf Proteinpeptidsubstraten, wodurch die Aktivität und Funktion des Ziels direkt beeinflusst werden. Studien mit radioaktiven Markierungen deuten darauf hin, dass etwa 30 % der Proteine ​​in eukaryotischen Zellen einer Phosphorylierung unterliegen.1, 2 Diese entscheidende posttranslationale Modifikation reguliert ein breites Spektrum zellulärer Aktivitäten, einschließlich des Zellzyklus, der Differenzierung, des Stoffwechsels und der neuronalen Kommunikation.

Außerdem sind abnormale Phosphorylierungsereignisse an vielen Krankheitszuständen beteiligt. Bei der Bewertung der Phosphorylierung kann die Methode der Wahl in Abhängigkeit von vielen Faktoren variieren, einschließlich der spezifischen Fragestellung und der Verfügbarkeit von Spezialgeräten oder Reagenzien. Diese Übersicht enthält eine kurze Beschreibung mehrerer derzeit verwendeter Methoden und geht auf einige der damit verbundenen Vor- und Nachteile ein.

Kinase-Aktivitäts-Assays

Proteinkinasen sind häufig gemeinsame Elemente in mehreren Signalnetzwerken, die zahlreiche nachgeschaltete Effektoren beeinflussen, die für eine biologische Reaktion verantwortlich sind.

  • Daher kann die Bestimmung der Aktivität einer einzelnen spezifischen Kinase wertvolle Informationen über parallele Wege liefern.3 Die Kinaseaktivität in einer biologischen Probe wird üblicherweise in vitro durch Inkubation der immunpräzipitierten Kinase mit einem exogenen Substrat in Gegenwart von ATP gemessen.
  • Die Messung des phosphorylierten Substrats durch eine spezifische Kinase kann mit mehreren Reportersystemen bewertet werden, einschließlich kolorimetrischer (Abbildung 1), radioaktiver oder fluorometrischer Detektion.4 Darüber hinaus bietet R&D Systems ein nicht-radioaktives Universal Kinase Activity Kit an, das die Quantifizierung von Kinase ermöglicht Aktivität für jede Kinase, die ADP produziert.
  • Obwohl Informationen über die Wirkungen einer bestimmten Kinase erhalten werden können, bietet die Bewertung der Enzymaktivität in Zellextrakten nur einen Einblick in die Signallandschaft. Über die modifizierten Proteine ​​wird wenig offenbart, und In-vitro-Aktivitätsassays gehen nicht auf die Rolle einer potenziellen endogenen Phosphataseaktivität ein.
  • Der direkte Nachweis von phosphorylierten Proteinen kann eine detailliertere Analyse der zellulären Reaktion auf einen externen Stimulus liefern, da die Identifizierung eines Phosphopeptids Informationen über die Expression und den funktionellen Zustand dieses Proteins liefert.

Phosphospezifische Antikörperentwicklung

Eine klassische Methode zur direkten Messung der Proteinphosphorylierung umfasst die Inkubation ganzer Zellen mit radioaktiv markiertem 32P-Orthophosphat, die Gewinnung von Zellextrakten, die Trennung von Proteinen durch SDS-PAGE und die Belichtung mit Film.2, 5 Diese arbeitsintensive Methode erfordert viele Multi -Stunden-Inkubationen und die Verwendung von Radioisotopen. Andere traditionelle Methoden umfassen die zweidimensionale Gelelektrophorese, eine Technik, die davon ausgeht, dass die Phosphorylierung die Mobilität und den isoelektrischen Punkt des Proteins verändert.

  • Angesichts dieser aufwändigen Methoden war die Entwicklung von phosphorylierungsabhängigen Antikörpern ein willkommenes Ereignis für die Forscher. 1981 wurde der erste dokumentierte Phospho-Antikörper in Kaninchen produziert, die mit Benzonylphosphonat, konjugiert an Keyhole-Limpet-Hämocyanin (KLH), immunisiert wurden.
  • Dieser Antikörper erkannte weitgehend Proteine, die Phosphotyrosin enthielten.6 Zehn Jahre später wurden Phosphorylierungsstatus-spezifische (Phospho-spezifische) Antikörper entwickelt, indem Kaninchen mit synthetischen Phosphopeptiden immunisiert wurden, die die Aminosäuresequenz darstellen, die die Phosphorylierungsstelle des Zielproteins umgibt.7
  • Das Immunserum war auf eine Peptidaffinitätssäule aufgetragen, um ein hochspezifisches Immunreagens zu erzeugen. Die Verfügbarkeit von Phospho-spezifischen Antikörpern hat die Tür für die Verbesserung traditioneller Methoden sowie für die Entwicklung neuer Immunoassay-Techniken geöffnet (Phospho-spezifische Antikörper anzeigen).
  • Der Hauptvorbehalt bei der Verwendung phosphospezifischer Antikörper in jeder Technik besteht darin, dass ein erfolgreicher Nachweis von der Spezifität und Affinität des Antikörpers für das interessierende Phosphoprotein abhängt.

Westlicher Fleck

Der Western Blot ist die gebräuchlichste Methode zur Bestimmung des Phosphorylierungszustands eines Proteins, und die meisten zellbiologischen Labors verfügen über die notwendige Ausrüstung, um diese Experimente durchzuführen. Nach Trennung der biologischen Probe mit SDS-PAGE und anschließender Übertragung auf eine Membran (normalerweise PVDF oder Nitrocellulose) kann ein phosphospezifischer Antikörper verwendet werden, um das interessierende Protein zu identifizieren (Phospho-spezifische Antikörper für die Western-Blot-Analyse anzeigen). Das typische Western-Blot-Protokoll eliminiert die Gefahren und Abfallentsorgungsanforderungen, die mit der Verwendung von Radioisotopen verbunden sind. Viele Phospho-spezifische Antikörper sind ziemlich empfindlich und können das phosphorylierte Protein in einer Routineprobe (z. B. 10–30 &mgr;g Ganzzellextrakt) leicht nachweisen. Da sich die gemessenen Spiegel eines Phosphoproteins mit der Behandlung oder durch Gelladefehler ändern können, verwenden Forscher oft einen Antikörper, der den Gesamtspiegel des verwandten Proteins (unabhängig vom Phosphorylierungszustand) nachweist, um den phosphorylierten Anteil im Verhältnis zum Gesamtanteil zu bestimmen und als interne Ladekontrolle dienen . Sowohl Chemilumineszenz- als auch kolorimetrische Nachweisverfahren sind üblich, und Molekulargewichtsmarker werden im Allgemeinen auch verwendet, um Informationen über die Proteinmasse bereitzustellen.

Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA)

Der ELISA ist zu einer leistungsfähigen Methode zur Messung der Proteinphosphorylierung geworden. ELISAs sind quantitativer als Western Blotting und zeigen einen großen Nutzen in Studien, die Kinaseaktivität und -funktion modulieren. Das Format für diesen auf Mikroplatten basierenden Assay verwendet typischerweise einen für das gewünschte Protein spezifischen Einfangantikörper, unabhängig vom Phosphorylierungszustand. Das Zielprotein, entweder gereinigt oder als Komponente in einer komplexen heterogenen Probe wie einem Zelllysat, wird dann an die Antikörper-beschichtete Platte gebunden. Anschließend wird ein für die zu analysierende Phosphorylierungsstelle spezifischer Nachweisantikörper zugegeben. Diese Assays werden typischerweise unter Verwendung einer kolorimetrischen oder fluorometrischen Detektion entwickelt. Die Intensität des resultierenden Signals ist direkt proportional zur Konzentration des in der ursprünglichen Probe vorhandenen phosphorylierten Proteins (Abbildung 3). Die Phospho-spezifische ELISA-Technik verleiht mehrere Vorteile gegenüber dem traditionelleren Immunoblotting bei der Messung der Proteinphosphorylierung. Erstens sind die Ergebnisse leicht quantifizierbar, indem ein kalibrierter Standard verwendet wird. Zweitens ist eine hohe Spezifität aufgrund der Verwendung von zwei für das Zielprotein spezifischen Antikörpern möglich, die gemeinsam im Sandwich-Format verwendet werden. Drittens ermöglicht die durch ELISAs oft erzielte höhere Empfindlichkeit kleinere Probenvolumina und den Nachweis von Proteinen mit geringer Häufigkeit.

Rabbit Anti Phosphothreonine Polyclonal Antibody,Biotin

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Phosphothreonine rabbit polyclonal antibody, HRP

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Phosphothreonine Antibody: Biotin

MBS805022-04mL MyBiosource 0.4mL 575 EUR

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Phosphothreonine antibody (biotin)

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Phosphothreonine Antibody, Clone 18F9: Biotin

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Retinoblastoma (Rb) phosphothreonine 826 Polyclonal Antibody

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Phosphothreonine [T252] aurora kinase B (AURKB) polyclonal antibody

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Rabbit Monoclonal Antibody against Phosphothreonine

TA160004 Origene Technologies GmbH 100 µl Ask for price

Anti- Phosphothreonine Antibody

GWB-57FE70 GenWay Biotech 0.05 mg Ask for price

Phosphothreonine antibody

20C-CR1334RP Fitzgerald 100 ug 95 EUR

Phosphothreonine Antibody

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Phosphothreonine antibody

70R-PR006 Fitzgerald 100 ug 95 EUR

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Phosphothreonine Antibody

R20193-100UG NSJ Bioreagents 100ug 390.15 EUR

Phosphothreonine Antibody

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Phosphothreonine Antibody

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abx448440-96tests Abbexa 96 tests 562.5 EUR

Phosphothreonine Antibody

MBS805510-04mL MyBiosource 0.4mL 525 EUR

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MBS805510-5x04mL MyBiosource 5x0.4mL 1830 EUR

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MBS474538-01mL MyBiosource 0.1mL 370 EUR

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MBS474538-5x01mL MyBiosource 5x0.1mL 1505 EUR

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Phosphothreonine antibody

MBS534668-5x01mg MyBiosource 5x0.1mg 785 EUR

Phosphothreonine antibody

MBS536220-01mg MyBiosource 0.1mg 200 EUR

Phosphothreonine antibody

MBS536220-5x01mg MyBiosource 5x0.1mg 740 EUR

Anti- Phosphothreonine-PROLINE Antibody

GWB-2AF90F GenWay Biotech 0.05 mg Ask for price

Phosphothreonine Antibody (APC)

abx448360-400ul Abbexa 400 ul 710.4 EUR

Phosphothreonine Antibody (RPE)

abx448402-400ul Abbexa 400 ul 710.4 EUR

Phosphothreonine Antibody (HRP)

abx448441-400ul Abbexa 400 ul 727.2 EUR

Phosphothreonine Antibody (HRP)

GWB-F11FAA GenWay Biotech 0.05 mg Ask for price

Antibody for Phosphothreonine

SPC-152F Stressmarq 0.4ml 501.6 EUR

Antibody for Phosphothreonine

SPC-154F-A565 Stressmarq 0.4ml 489.6 EUR

Antibody for Phosphothreonine

SPC-154F-A633 Stressmarq 0.4ml 489.6 EUR

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SPC-154F-A655 Stressmarq 0.4ml 489.6 EUR

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SPC-154F-A680 Stressmarq 0.4ml 489.6 EUR

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SPC-154F-A700 Stressmarq 0.4ml 489.6 EUR

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SPC-154F-ALP Stressmarq 0.4ml 483.6 EUR

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SPC-154F-APC Stressmarq 0.4ml 489.6 EUR

Antibody for Phosphothreonine

SPC-154F-APCCY7 Stressmarq 0.4ml 576 EUR

Antibody for Phosphothreonine

SPC-154F-DY350 Stressmarq 0.4ml 507.6 EUR

Antibody for Phosphothreonine

SPC-154F-DY405 Stressmarq 0.4ml 493.2 EUR

Antibody for Phosphothreonine

SPC-154F-DY488 Stressmarq 0.4ml 482.4 EUR

Antibody for Phosphothreonine

SPC-154F-DY594 Stressmarq 0.4ml 484.8 EUR

Antibody for Phosphothreonine

SPC-154F-DY633 Stressmarq 0.4ml 478.8 EUR

Antibody for Phosphothreonine

SPC-154F-P594 Stressmarq 0.4ml 498 EUR

Antibody for Phosphothreonine

SPC-154F-PCP Stressmarq 0.4ml 489.6 EUR

Antibody for Phosphothreonine

SPC-154F-RPE Stressmarq 0.4ml 487.2 EUR

Antibody for Phosphothreonine

SPC-154F-STR Stressmarq 0.4ml 488.4 EUR

Phosphothreonine Antibody: HRP

MBS806657-04mL MyBiosource 0.4mL 590 EUR

Phosphothreonine Antibody: HRP

MBS806657-5x04mL MyBiosource 5x0.4mL 2120 EUR

Phosphothreonine Antibody: RPE

MBS805718-04mL MyBiosource 0.4mL 575 EUR

Phosphothreonine Antibody: RPE

MBS805718-5x04mL MyBiosource 5x0.4mL 2055 EUR

Phosphothreonine Antibody (FITC)

abx448374-400ul Abbexa 400 ul 693.6 EUR

Phosphothreonine Antibody (FITC)

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Phosphothreonine Antibody (FITC)

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Phosphothreonine Antibody (FITC)

abx448374-96tests Abbexa 96 tests 612.5 EUR

Phosphothreonine Antibody: FITC

MBS805368-04mL MyBiosource 0.4mL 570 EUR

Phosphothreonine Antibody: FITC

MBS805368-5x04mL MyBiosource 5x0.4mL 2030 EUR

Phosphothreonine-Pro antibody

20R-PR017 Fitzgerald 100 ug 95 EUR

Phosphothreonine Antibody (PerCP)

abx448394-400ul Abbexa 400 ul 710.4 EUR

Phosphothreonine Antibody: PerCP

MBS805891-04mL MyBiosource 0.4mL 580 EUR

Phosphothreonine Antibody: PerCP

MBS805891-5x04mL MyBiosource 5x0.4mL 2065 EUR

Phosphothreonine-Pro antibody

MBS535083-01mg MyBiosource 0.1mg 205 EUR

Phosphothreonine-Pro antibody

MBS535083-5x01mg MyBiosource 5x0.1mg 785 EUR

Phosphothreonine Antibody (ATTO390)

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Phosphothreonine Antibody (ATTO390)

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Phosphothreonine Antibody (ATTO390)

abx448288-96tests Abbexa 96 tests 625 EUR

Phosphothreonine Antibody (ATTO488)

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Phosphothreonine Antibody (ATTO488)

abx448296-596tests Abbexa 5 × 96 tests Ask for price

Phosphothreonine Antibody (ATTO488)

abx448296-96tests Abbexa 96 tests 625 EUR

Phosphothreonine Antibody (ATTO594)

abx448312-1096tests Abbexa 10 × 96 tests Ask for price

Phosphothreonine Antibody (ATTO594)

abx448312-596tests Abbexa 5 × 96 tests Ask for price

Phosphothreonine Antibody (ATTO594)

abx448312-96tests Abbexa 96 tests 625 EUR

Phosphothreonine Antibody (ATTO 390)

abx448288-400ul Abbexa 400 ul 710.4 EUR

Phosphothreonine Antibody (ATTO 488)

abx448296-400ul Abbexa 400 ul 710.4 EUR

Phosphothreonine Antibody (ATTO 565)

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Phosphothreonine Antibody (ATTO 594)

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Phosphothreonine Antibody (ATTO 633)

abx448320-400ul Abbexa 400 ul 710.4 EUR

Phosphothreonine Antibody (ATTO 655)

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Phosphothreonine Antibody (ATTO 680)

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Phosphothreonine Antibody (ATTO 700)

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Phosphothreonine Antibody: ATTO 390

MBS805131-04mL MyBiosource 0.4mL 580 EUR

Phosphothreonine Antibody: ATTO 390

MBS805131-5x04mL MyBiosource 5x0.4mL 2075 EUR

Phosphothreonine Antibody: ATTO 594

MBS805856-04mL MyBiosource 0.4mL 580 EUR

Phosphothreonine Antibody: ATTO 594

MBS805856-5x04mL MyBiosource 5x0.4mL 2070 EUR

Phosphothreonine Antibody: ATTO 488

MBS806162-04mL MyBiosource 0.4mL 580 EUR

Phosphothreonine Antibody: ATTO 488

MBS806162-5x04mL MyBiosource 5x0.4mL 2070 EUR

Anti-Retinoblastoma protein phosphothreonine 821 Antibody

3117 Genovis AB 25ug 200 EUR

Anti-Retinoblastoma protein phosphothreonine 826 Antibody

3118 Genovis AB 25ug 200 EUR

Phosphothreonine Antibody, Clone 18F9

SMC-158D Stressmarq 0.1ml 295 EUR

Phosphothreonine Antibody (Streptavidin)

abx448410-400ul Abbexa 400 ul 710.4 EUR

Phosphothreonine Antibody (PE / ATTO 594)

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Phosphoserine and Phosphothreonine antibody

70R-10686 Fitzgerald 1 ml 368 EUR

Phosphoserine and Phosphothreonine antibody

MBS837765-1mL MyBiosource 1mL 630 EUR

Phosphoserine and Phosphothreonine antibody

MBS837765-5x1mL MyBiosource 5x1mL 2690 EUR

Monoclonal antibody for Phosphothreonine

SMC-158D-A565 Stressmarq 0.1ml 441.6 EUR

Monoclonal antibody for Phosphothreonine

SMC-158D-A633 Stressmarq 0.1ml 441.6 EUR

Monoclonal antibody for Phosphothreonine

SMC-158D-A655 Stressmarq 0.1ml 441.6 EUR

Monoclonal antibody for Phosphothreonine

SMC-158D-A680 Stressmarq 0.1ml 441.6 EUR

Monoclonal antibody for Phosphothreonine

SMC-158D-A700 Stressmarq 0.1ml 441.6 EUR

Monoclonal antibody for Phosphothreonine

SMC-158D-ALP Stressmarq 0.1ml 434.4 EUR

Monoclonal antibody for Phosphothreonine

SMC-158D-APC Stressmarq 0.1ml 440.4 EUR

Monoclonal antibody for Phosphothreonine

SMC-158D-APCCY7 Stressmarq 0.1ml 528 EUR

Monoclonal antibody for Phosphothreonine

SMC-158D-DY350 Stressmarq 0.1ml 459.6 EUR

Monoclonal antibody for Phosphothreonine

SMC-158D-DY405 Stressmarq 0.1ml 445.2 EUR

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Monoclonal antibody for Phosphothreonine

SMC-158D-DY594 Stressmarq 0.1ml 435.6 EUR

Monoclonal antibody for Phosphothreonine

SMC-158D-DY633 Stressmarq 0.1ml 430.8 EUR

Monoclonal antibody for Phosphothreonine

SMC-158D-HRP Stressmarq 0.1ml 428.4 EUR

Monoclonal antibody for Phosphothreonine

SMC-158D-P594 Stressmarq 0.1ml 450 EUR

Monoclonal antibody for Phosphothreonine

SMC-158D-PCP Stressmarq 0.1ml 440.4 EUR

Monoclonal antibody for Phosphothreonine

SMC-158D-RPE Stressmarq 0.1ml 438 EUR

Monoclonal antibody for Phosphothreonine

SMC-158D-STR Stressmarq 0.1ml 439.2 EUR

Phosphothreonine monoclonal antibody (1E11)

MBS566309-01mg MyBiosource 0.1mg 740 EUR

Phosphothreonine monoclonal antibody (1E11)

MBS566309-5x01mg MyBiosource 5x0.1mg 3295 EUR

Phosphothreonine Antibody, Clone 18F9: FITC

SMC-158D-FITC Stressmarq 0.1ml 339 EUR

Phosphothreonine Antibody (Alkaline Phosphatase)

abx448352-400ul Abbexa 400 ul 693.6 EUR

Phosphothreonine Antibody: Alkaline Phosphatase

MBS806273-04mL MyBiosource 0.4mL 575 EUR

Phosphothreonine Antibody: Alkaline Phosphatase

MBS806273-5x04mL MyBiosource 5x0.4mL 2040 EUR

Phosphothreonine

PC-498 Kamiya Biomedical Company Polyclonal Ask for price

Phosphothreonine

AS18-4171 Agrisera AB 400 µl 377 EUR

Phosphothreonine

MBS6508127-005mg MyBiosource 0.05mg 800 EUR

Phosphothreonine

MBS6508127-5x005mg MyBiosource 5x0.05mg 3450 EUR

Phosphothreonine

MBS6508128-01mL MyBiosource 0.1mL 985 EUR

Phosphothreonine

MBS6508128-5x01mL MyBiosource 5x0.1mL 4270 EUR

Phosphothreonine

MBS8535137-01mL MyBiosource 0.1mL 345 EUR

Phosphothreonine

MBS8535137-01mLAF405L MyBiosource 0.1mL(AF405L) 565 EUR

Phosphothreonine

MBS8535137-01mLAF405S MyBiosource 0.1mL(AF405S) 565 EUR

Phosphothreonine

MBS8535137-01mLAF610 MyBiosource 0.1mL(AF610) 565 EUR

Phosphothreonine

MBS8535137-01mLAF635 MyBiosource 0.1mL(AF635) 565 EUR

Phosphothreonine Antibody, Clone 18F9: ATTO 390

SMC-158D-A390 Stressmarq 0.1ml 349 EUR

Phosphothreonine Antibody, Clone 18F9: ATTO 488

SMC-158D-A488 Stressmarq 0.1ml 348 EUR

Phosphothreonine Antibody, Clone 18F9: ATTO 594

SMC-158D-A594 Stressmarq 0.1ml 348 EUR

Anti-Retinoblastoma protein phosphoserine 249/phosphothreonine 252 Antibody

3112 Genovis AB 25ug 200 EUR

Phospho-threonine [T497] PKCalpha (PRKCA) polyclonal antibody

ABP-PAB-11667 Allele Biotech 100 ug Ask for price

Phosphothreonine (AP)

MBS6257868-01mL MyBiosource 0.1mL 1055 EUR

Phosphothreonine (AP)

MBS6257868-5x01mL MyBiosource 5x0.1mL 4585 EUR

Phospho-threonine [T198] PKACbeta (PRKACB) polyclonal antibody

ABP-PAB-11662 Allele Biotech 100 ug Ask for price

Phosphothreonine (APC)

MBS6258077-01mL MyBiosource 0.1mL 1055 EUR

Phosphothreonine (APC)

MBS6258077-5x01mL MyBiosource 5x0.1mL 4585 EUR

Phosphothreonine (HRP)

MBS6258702-01mL MyBiosource 0.1mL 1055 EUR

Phosphothreonine (HRP)

MBS6258702-5x01mL MyBiosource 5x0.1mL 4585 EUR

Phosphothreonine (FITC)

MBS6258494-01mL MyBiosource 0.1mL 1055 EUR

Phosphothreonine (FITC)

MBS6258494-5x01mL MyBiosource 5x0.1mL 4585 EUR

Phosphothreonine-PE

MBS6258910-01mL MyBiosource 0.1mL 1055 EUR

Schließlich ermöglicht das Mikroplatten-basierte Format einen viel höheren Durchsatz als herkömmliches Western Blotting (View Surveyor IC ELISA Kits). ELISAs liefern im Allgemeinen eine indirekte Messung der Kinaseaktivität. Variationen der oben beschriebenen Technik verwenden jedoch einen immobilisierten Capture-Antikörper, ein Substrat und ein Phospho-Substrat-Nachweisverfahren für direktere Messungen der Kinase-Aktivität.

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