• August 16, 2022

Messung von Progesteron bei Schafen mit einem kommerziellen ELISA-Kit für Humanplasma

Die Bestimmung der Serum- oder Plasmakonzentration von Progesteron (P4) ist wichtig, um trächtige und nicht trächtige Mutterschafe zu erkennen und auch um die Anzahl der ausgetragenen Lämmer vorherzusagen. Die beiden gängigsten Methoden für den Nachweis von P4 im Plasma sind der Radioimmunoassay (RIA) und der Enzymimmunoassay (EIA). RIA ist sehr teuer, und nicht alle Labors sind für die Durchführung dieses Tests ausgerüstet; EIA ist für den menschlichen Gebrauch im Handel erhältlich, aber nur wenige Unternehmen stellen artspezifische Kits her, die teuer sind. Wir haben für Schafsplasma einen weniger teuren und leicht erhältlichen ELISA-Kit (DiaMetra) für die Quantifizierung von P4 beim Menschen getestet.

Anhand von Schaf- und Humanplasmapools wurden Wiederholbarkeit, Genauigkeit, Empfindlichkeit und Stabilität der P4-Messung mit dem DiaMetra-Kit verglichen. Die Wiederholbarkeit lag innerhalb von 15 %, und die Genauigkeit betrug für beide Plasmamatrices ~90 %. Die Stabilitätsdaten zeigten einen Verlust von <20% bei Gefrier-Auftau und <30% bei 30-tägiger Lagerung. Alle Parameter waren nach den internationalen Richtlinien für die Methodenvalidierung akzeptabel. Der Human-ELISA-Kit wurde erfolgreich zur Quantifizierung von P4 im Plasma von 26 Mutterschafen während der Trächtigkeit bis zur Entbindung eingesetzt. Die P4-Konzentrationen korrelierten auch mit der Anzahl der geborenen Lämmer.

Ein Leptin-Sandwich-ELISA-Kit, der für Haustiere unbrauchbar ist

Es wird über einen Fall berichtet, in dem eine Hormontestmethode fehlerhaft ist. In der Zeitschrift Chronobiology International erschienen zwei Artikel, in denen eine ELISA-Methode für Humanserum oder -plasma für Blutserum von Pferden bzw. Schafen verwendet wurde. Unsere Tests ergaben, dass diese Methode bei Pferden, Schafen und anderen Tierarten überhaupt nicht funktioniert Gentaur . Die Verwendung kommerzieller Hormontestkits für heterologe Tierarten erfordert immer ein sorgfältiges Validierungsverfahren. Erstens könnte das gleiche Hormonmolekül bei verschiedenen Tierarten nicht genügend Homologie aufweisen, um von den in der Methode verwendeten Antikörpern erkannt zu werden und mit ihnen zu reagieren. Darüber hinaus müssen selbst bei einer vollständigen Überlappung der Moleküle mögliche Interferenzen durch andere Bestandteile der Probe (Matrixeffekt) berücksichtigt werden.

Technische Durchführbarkeit des YF MAC-HD ELISA-Kits für die Verwendung in Gelbfieber-Endemiegebieten

Gelbfieber (YF), eine arbovirale Krankheit, betrifft schätzungsweise 200.000 Menschen und verursacht 30.000 Todesfälle pro Jahr und hat in letzter Zeit große Epidemien in Afrika und Südamerika verursacht. Die rechtzeitige und genaue Diagnose von YF ist entscheidend für die Bekämpfung von Ausbrüchen und die Durchführung von Impfkampagnen. Ein YF-Immunglobulin M (IgM)-Antikörper-Capture (MAC) Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) Kit, der YF MAC-HD, wurde ab 2018 erfolgreich in Labors in Afrika und Südamerika eingeführt.

Der YF MAC-HD-Kit kann in 3,5 Stunden durchgeführt werden, testet bis zu 24 Proben und enthält alle für die Durchführung des Tests erforderlichen Reagenzien, mit Ausnahme von Wasser zur Verdünnung des Waschpuffers. In den Jahren 2018 und 2019 wurden insgesamt 56 Labormitarbeiter aus 39 Ländern in Afrika und Südamerika im Rahmen von Workshops in der Verwendung des Kits geschult, gefolgt von YF-IgM-Leistungstests (PT) zum Mitnehmen. Die Teilnehmer erhielten entweder ein YF-PT-Panel mit 10 oder 20 Proben und führten die Tests mit dem YF MAC-HD-Kit durch. Alle Länder erzielten 90 % oder mehr korrekte Ergebnisse. Diese Ergebnisse bestätigten die technische Durchführbarkeit und Übertragbarkeit der Verwendung des YF MAC-HD-Kits für Labors in YF-endemischen Ländern.

Bewertung von Gluten in Bier: Vergleich verschiedener kommerzieller ELISA-Kits und Bewertung der NIR-Analyse als ergänzende Technik

Traditionell werden Biere mit glutenhaltigem Getreide hergestellt. Es ist von entscheidender Bedeutung, über schnelle Analysemethoden zu verfügen, die eine Kontrolle des Glutengehalts von Bieren für Zöliakie-Konsumenten ermöglichen. Wir untersuchen den Glutengehalt von 65 konventionellen und 41 als glutenfrei gekennzeichneten Bieren, die in Europa vermarktet werden, und vergleichen die Ergebnisse in einer Untergruppe von 71 Bieren mit drei ELISA-Kits. Diese Untersuchung ermöglicht es, Informationen über den potenziellen ergänzenden Nutzen der NIR-Analyse bei der Glutenanalyse von glutenfreien Bieren im Hinblick auf eine Zeitersparnis zu sammeln.

Die mit der ELISA-Technik erzielten Ergebnisse zeigen, dass der wettbewerbsfähige R5-Kit am empfindlichsten für den Nachweis von Prolaminen ist, da er eine höhere Anzahl von Bieren mit einem Glutengehalt von mehr als 20 mg/kg nachweist. Der Glutengehalt in den getesteten konventionellen Bieren stieg mit dem Vorhandensein von Weizen als Rohstoff und mit der Verwendung von Bierhefen an. Bei Verwendung des Wettbewerbsverfahrens R5 schienen 3 der 41 als glutenfrei gekennzeichneten Biere einen Glutengehalt von über 20 mg/kg aufzuweisen, während umgekehrt 15 der 65 konventionellen Biere einen Glutengehalt unter diesem Schwellenwert aufwiesen. Nach unseren Ansätzen erreichte die NIR keine geeignete Korrelation mit den ELISA-Ergebnissen, weder für die Quantifizierung noch für die Unterscheidung von Gluten, und kann daher nicht als ergänzende Technik vorgeschlagen werden.

Technische Eignung des YF MAC-HD ELISA-Kits für die Verwendung in Gelbfieber-Endemiegebieten

Gelbfieber (YF), eine arbovirale Krankheit, betrifft schätzungsweise 200.000 Menschen und verursacht 30.000 Todesfälle pro Jahr und hat in letzter Zeit große Epidemien in Afrika und Südamerika verursacht. Die rechtzeitige und genaue Diagnose von YF ist entscheidend für die Bekämpfung von Ausbrüchen und die Durchführung von Impfkampagnen. Ein YF-Immunglobulin M (IgM)-Antikörper-Capture (MAC) Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) Kit, der YF MAC-HD, wurde ab 2018 erfolgreich in Labors in Afrika und Südamerika eingeführt. Der YF MAC-HD-Kit kann in 3,5 Stunden durchgeführt werden, testet bis zu 24 Proben und enthält alle für die Durchführung des Tests erforderlichen Reagenzien, mit Ausnahme von Wasser zur Verdünnung des Waschpuffers. In den Jahren 2018 und 2019 wurden insgesamt 56 Labormitarbeiter aus 39 Ländern in Afrika und Südamerika im Rahmen von Workshops in der Verwendung des Kits geschult, gefolgt von YF-IgM-Leistungstests (PT) zum Mitnehmen. Die Teilnehmer erhielten entweder ein YF-PT-Panel mit 10 oder 20 Proben und führten die Tests mit dem YF MAC-HD-Kit durch. Alle Länder erzielten 90 % oder mehr korrekte Ergebnisse. Diese Ergebnisse bestätigten die technische Durchführbarkeit und Übertragbarkeit der Verwendung des YF MAC-HD-Kits für Labors in YF-endemischen Ländern.

Bewertung von Gluten in Bier: Vergleich verschiedener kommerzieller ELISA-Kits und Bewertung der NIR-Analyse als ergänzende Technik

Traditionell werden Biere mit glutenhaltigem Getreide hergestellt. Es ist von entscheidender Bedeutung, über schnelle Analysemethoden zu verfügen, die eine Kontrolle des Glutengehalts von Bieren für Zöliakie-Konsumenten ermöglichen. Wir untersuchen den Glutengehalt von 65 konventionellen und 41 als glutenfrei gekennzeichneten Bieren, die in Europa vermarktet werden, und vergleichen die Ergebnisse in einer Untergruppe von 71 Bieren mit drei ELISA-Kits. Diese Untersuchung ermöglicht es, Informationen über den potenziellen ergänzenden Nutzen der NIR-Analyse bei der Glutenanalyse von glutenfreien Bieren im Hinblick auf eine Zeitersparnis zu sammeln. Die mit der ELISA-Technik erzielten Ergebnisse zeigen, dass der wettbewerbsfähige R5-Kit am empfindlichsten für den Nachweis von Prolaminen ist, da er eine höhere Anzahl von Bieren mit einem Glutengehalt von mehr als 20 mg/kg nachweist.

Der Glutengehalt in den getesteten konventionellen Bieren stieg mit dem Vorhandensein von Weizen als Rohstoff und mit der Verwendung von Bierhefen an. Bei Verwendung des Wettbewerbsverfahrens R5 schienen 3 der 41 als glutenfrei gekennzeichneten Biere einen Glutengehalt von über 20 mg/kg aufzuweisen, während umgekehrt 15 der 65 konventionellen Biere einen Glutengehalt unter diesem Schwellenwert aufwiesen. Nach unseren Ansätzen erreichte die NIR keine geeignete Korrelation mit den ELISA-Ergebnissen, weder für die Quantifizierung noch für die Unterscheidung von Gluten, und kann daher nicht als ergänzende Technik vorgeschlagen werden.

 

Evaluierung des Loopamp Leishmania Detection Kits und des Leishmania Antigen ELISA für die Erkennung und das Management der viszeralen Leishmaniose in Bangladesch nach der Ausrottung

Da die Prävalenz der viszeralen Leishmaniose (VL) auf dem indischen Subkontinent (ISC) zurückgegangen ist, werden direkte und vor Ort einsetzbare diagnostische Tests benötigt, um einen wirksamen Diagnose- und Überwachungsalgorithmus für die VL-Kontrolle nach der Eliminierung umzusetzen. In diesem Zusammenhang untersuchten wir hier die diagnostische Wirksamkeit eines LAMP-Tests (Loop-mediated isothermal amplification) (Loopamp Leishmania Detection Kit, Eiken Chemical CO., Ltd, Japan), eines quantitativen Echtzeit-PCR-Tests (qPCR) und des Leishmania-Antigen-ELISA (CLIN-TECH, UK) mit verschiedenen Probenahmetechniken und bewerteten ihre Aussichten auf Einbeziehung in VL-Kontrollstrategien nach der Eliminierung.

  • Achtzig klinisch und mit dem rK39-Schnelltest bestätigte VL-Fälle und 80 endemische gesunde Kontrollen wurden in die Studie aufgenommen. Von allen Teilnehmern wurden zum Zeitpunkt der Diagnose peripheres Blut und getrocknete Blutflecken (DBS) entnommen. Die DNA wurde aus Vollblut (WB) und DBS mit Hilfe von Kieselgelsäulen (QIAGEN) und Boil & Spin (B&S)-Methoden extrahiert und mit qPCR und Loopamp getestet.
  • Von allen Teilnehmern wurde zum Zeitpunkt der Diagnose Urin gesammelt und direkt dem Leishmania-Antigen-ELISA unterzogen. 41 Patienten wurden nachbeobachtet, und am 30. und 180. Tag nach der Behandlung wurden Urinproben entnommen und der ELISA durchgeführt.
  • Die Sensitivität von Loopamp-WB(B&S) und Loopamp-WB(QIA) betrug 96,2% (95% CI 89-43-99-22) bzw. 95% (95% CI 87-69-98-62). Die Empfindlichkeit von Loopamp-DBS(QIA) betrug 85 % (95 % CI 75-26- 92-00). Die Sensitivität von qPCR-WB(QIA) und qPCR-DBS(QIA) betrug 93,8% (95% CI 86-01-97-94) bzw. 72,5% (95% CI 61-38-81-90).
  • Die Spezifität aller molekularen Assays lag bei 100 %. Sensitivität und Spezifität des Leishmania-Antigen-ELISA lagen bei 97,5 % (95 % CI 91-47-99-70) bzw. 91,95 % (95 % CI 84-12-96-70). Der Leishmania-Antigen-ELISA zeigte bei allen nachbeobachteten Fällen eine klinische Heilung am Tag 180 an.
  • Wirksamkeit und Nachhaltigkeit weisen den Loopamp-WB(B&S) und den Leishmania-Antigen-ELISA als vielversprechende und minimalinvasive VL-Diagnoseinstrumente aus, die die VL-Diagnose und die Überwachungsaktivitäten in der Zeit nach der Eliminierung unterstützen.

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