• Mai 21, 2022

Exo-Flow32 CD9 IP-Kit

Abstrakt
Extrazelluläre Vesikel (EVs) haben als potenzielle Ziele der Frühdiagnostik und Prognose im Bereich der Flüssigbiopsie Aufmerksamkeit erregt. Trotz des klinischen Potenzials bleibt die beste Methode zur Isolierung von Elektrofahrzeugen aus Proben aufgrund der geringen Reinheit, geringen Spezifität und mangelnden Reproduzierbarkeit mit aktuellen Isolierungsmethoden umstritten. Hier zeigen wir, dass ein Chelatbildner die Rückgewinnungseffizienz von Elektrofahrzeugen aus biologischen Rohproben durch Immunpräzipitation mit einem Anti-CD9-Antikörper erhöht. Proteomik- und Western-Blotting-Analysen zeigen, dass die mit dem Chelatbildner isolierten Elektrofahrzeuge eine größere Vielfalt an Proteinen enthalten als die mit PBS isolierten.

Einführung

Elektrofahrzeuge werden von allen Arten von Zellen ausgeschieden und finden sich in den meisten Körperflüssigkeiten, einschließlich Blut, Urin und Speichel(1–3). Es wurde über mehrere Funktionen von Elektrofahrzeugen berichtet, z. B. interzelluläre Interaktion und Krebsmetastasierung; Die genaue biologische Rolle von Elektrofahrzeugen ist jedoch unklar.

  • Darüber hinaus enthalten Elektrofahrzeuge mehrere biologisch aktive Moleküle wie Proteine, mRNA, miRNA, lange nicht kodierende RNA (lncRNA), DNA und Phospholipide, die den Zustand von Zellen oder Organen widerspiegeln (4,5).
  • Es wird erwartet, dass solche in Elektrofahrzeugen gefundenen Biomoleküle als diagnostische Biomarker oder prognostische Marker für verschiedene Krankheiten in klinischen Bereichen dienen.
  • Trotz des hohen klinischen Bedarfs wurde die EV-basierte Flüssigbiopsie aufgrund fehlender standardisierter Isolierungsmethoden aus Proben noch nicht weit verbreitet. Die am häufigsten verwendeten Techniken zur EV-Isolierung sind Ultrazentrifugation (UC) und polymerbasierte Präzipitation.
  • UC- und polymerbasierte Präzipitationsmethoden verursachen jedoch eine Aggregation von Elektrofahrzeugen (6). Darüber hinaus werden diese Techniken durch eine geringe Selektivität beeinträchtigt: EVs umfassen Mikrovesikel, apoptotische Körper und Exosomen (7), und eine solche Heterogenität führt zu einem Mangel an Reproduzierbarkeit und Zuverlässigkeit, was die klinische Anwendung behindert.
  • Jüngste Studien legen nahe, dass die Oberfläche von Elektrofahrzeugen positiv geladen ist und negativ geladene Moleküle anzieht, wie z. B. DNA- und RNA-bindende Proteine, die auf der Oberfläche von Elektrofahrzeugen gefunden werden (8).

Eine schnelle und selektive Isolierung von Elektrofahrzeugen ist durch Immunpräzipitation (IP)-Methoden unter Verwendung von Antikörpern gegen interessierende Oberflächenmarkerproteine ​​möglich. Daher haben wir eine IP-Methode basierend auf Oberflächenmarkerproteinen zur schnellen und spezifischen Isolierung von Elektrofahrzeugen eingesetzt. Obwohl die Rückgewinnungsrate von Elektrofahrzeugen durch die IP-Methode für den klinischen Einsatz nicht ausreicht, berichten wir hier, dass die IP-Methode mit einem Chelatbildner die Ausbeute und Reinheit von Elektrofahrzeugen aus mehreren menschlichen Proben verbessert. Die isolierten EVs konnten für quantitative und qualitative proteomische Analysen mit LC-MS/MS verwendet werden. Wir berichten, dass die IP-Methode mit einem Chelatbildner die Ausbeute und Reinheit von Elektrofahrzeugen aus mehreren menschlichen Proben verbessert.

Materialen und Methoden

Materialien
NIH-H1299-Zelllinien wurden von ATCC erhalten. Minimum Essential Medium (MEM)-Lösung nicht-essentieller Aminosäuren und Penicillin-Streptomycin-Lösung (x100) wurden von FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation erworben. Fötales Rinderserum (FBS) wurde von Gibco, Thermo Fisher Scientific Inc. bezogen. Ethylendiamintetraessigsäure (EDTA) und Glykoletherdiamin-N,N,N’,N’-tetraessigsäure (EGTA) wurden von Dojindo Molecular Technologies, Inc. 1, bezogen. 4-Dithiothreitol (DTT) wurde von FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation bezogen. Anti-CD81-Antikörper (SHI-EXO-MO3) und gepooltes Humanserum wurden von Cosmo Bio Co., Ltd. erworben. Ein passender Probensatz wurde von ProMedDx, LLC, erworben. MagCapture Exosome Isolation Kit PS wurde von FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation erworben. Total Exosome Isolation Reagent (aus Serum) wurde von Thermo Fisher Scientific Inc. erworben. Die folgenden Antikörper wurden für die Immunfärbung verwendet: Ziegen-Anti-Mensch-Albumin-Antikörper HRP Conjugated (A80-129P, Bethyl Laboratories, Inc.), Ziegen-Anti-Mensch-IgG H&L (HRP) (ab6858, Abcam plc), Anti-Apolipoprotein E-Antikörper (Biotin) (ab24274, Abcam plc). Freiwillige für Speichel- und Urinproben wurden vom Miraca Research Institute G.K. rekrutiert, und die Studie wurde mit Genehmigung (18–30) des institutionellen Prüfungsausschusses von Miraca Holdings, Inc. durchgeführt EDEG.

Vorbereitung von Serum-EVs durch UC
Serum (1 ml) wurde bei 15.000 x g für 15 min bei 4°C zentrifugiert, und der Überstand wurde bei 100.000 x g für 1 h bei 4°C von himac (Koki Holdings Co., Ltd.) mit S55A2-Rotor (k-Faktor : 162). Das Pellet wurde in 1 ml PBS oder EDEG (50 mM EDTA und 50 mM EGTA in PBS) resuspendiert, gefolgt von Ultrazentrifugation bei 100.000 x g für 1 h bei 4°C, um andere kontaminierende Moleküle zu entfernen. Die resultierenden Elektrofahrzeuge wurden in PBS resuspendiert und bis zur Verwendung bei 4 °C gelagert.

EV-Isolierung aus Kulturmedien durch UC
NIH-H1299-Zellen wurden in 10 % FBS, MEM-Lösung nicht-essentieller Aminosäuren (x 100) und Penicillin-Streptomycin-Lösung (x 100) gezüchtet. Subkonfluente Zellen wurden zweimal mit PBS gewaschen und vor der EV-Isolierung 72 h in FBS-freiem Medium gezüchtet. Die Zellkulturüberstände wurden gesammelt und durch Membranen mit 0,22 &mgr;m Poren unter Verwendung des Vakuumfilter/Lagerflaschensystems (Corning Incorporated) filtriert, um große kontaminierende Vesikel zu entfernen. Das erhaltene konditionierte Medium wurde bei 2.000 x g für 5 min bei 4°C zentrifugiert, gefolgt von einer Konzentration unter Verwendung einer Amicon Ultra-15-Zentrifugalfiltereinheit (100 kDa Cutoff, Merck KGaA). Das konzentrierte Medium (6 ml) wurde bei 15.000 x g für 15 min bei 4°C zentrifugiert, und der Überstand wurde gefolgt von einer Ultrazentrifugation bei 100.000 x g für 1 h bei 4°C durch himac (Koki Holdings Co., Ltd.) mit einem S55A2 Rotor (k-Faktor: 161,6). Das Pellet wurde in 100 &mgr;l PBS oder EDEG (50 mM EDTA und 50 mM EGTA in PBS) resuspendiert, gefolgt von Ultrazentrifugation bei 100.000 × g für 1 Stunde bei 4°C. Das resultierende Pellet, das EVs enthält, wurde in PBS resuspendiert und bis zur Verwendung bei 4 °C gelagert. Die Proteinkonzentration der gereinigten EVs wurde mit dem Qubit Protein Assay Kit (Thermo Fisher Scientific Inc.) bestimmt.

Fällung auf Polymerbasis
Total Exosome Isolation Reagent (aus Serum) wurde gemäß den Anweisungen des Herstellers verwendet. Gefrorenes gepooltes Serum wurde bei Raumtemperatur aufgetaut und für 30 min bei 2000 x g bei 4°C zentrifugiert. Der Überstand (1 ml) wurde mit 60 μl Total Exosome Isolation Reagent (aus Serum) gemischt. Die Probe wurde 30 min bei 4°C inkubiert. Das Gemisch wurde bei 10.000 x g bei 4°C zentrifugiert und das erhaltene Pellet wurde in PBS resuspendiert. Das Elektrofahrzeug enthaltende Pellet wurde bis zur Verwendung bei 4 °C gelagert.

Herstellung von Antikörpern gegen CD9 und CD63
Antikörper gegen CD9 und CD63 wurden wie zuvor beschrieben (9) hergestellt, mit der Modifikation, dass 50 &mgr;g EVs von NIH-H1299, erhalten durch ein Ultrazentrifugationsverfahren, als Antigenquelle verwendet wurden. Biotinylierungen des monoklonalen Anti-CD9-Antikörpers und des monoklonalen Anti-CD63-Antikörpers wurden unter Verwendung von EZ-Link™ Sulfo-NHS-LC-Biotin (Thermo Fisher Scientific Inc.) gemäß dem Protokoll des Herstellers durchgeführt.

IP von Elektrofahrzeugen
Anti-CD9-Antikörper gekoppelt mit Dynabeads M-280 Tosylactivated (Thermo Fisher Scientific Inc.) wurde zu abgestimmten Proben (Serum und Plasma), Urin und Speichel gegeben, die 1:3 mit EDEG oder PBS verdünnt wurden, gefolgt von einer Inkubation auf a Rotator bei 4°C für 18 h. Die Kügelchen wurden dreimal mit PBS gewaschen und bis zur weiteren Analyse bei 4°C gelagert.

Western-Blotting-Analyse
Die Antikörper wurden mit Can Get Signal (TOYOBO Co., LTD.) auf 1 &mgr;g/ml verdünnt. Immunabgefangene EVs auf Dynabeads M-280 Tosylactivated wurden mit 4x Laemmli Sample Buffer (Bio-Rad Laboratories, Inc.) unter nicht reduzierenden Bedingungen (ohne DTT) für CD9, CD63 und CD81 oder reduzierenden Bedingungen (ergänzt mit 50 mM DTT) für andere lysiert Proteine, gefolgt von 5 min Kochen bei 96°C. Die erhaltenen Proteinproben wurden durch SDS-PAGE aufgetrennt und dann auf PVDF-Membranen (ATTO Corporation.) übertragen. Nach dem Blockieren mit Blocking One (NACALAI TESQUE, INC.) wurden die Membranen mit primären Antikörpern inkubiert, gefolgt von einer 1-stündigen Inkubation mit sekundären Antikörpern bei Raumtemperatur. Die Membranen wurden dreimal mit PBS mit Tween 20 (TAKARA BIO INC.) gewaschen und mit sekundären Antikörpern für 1 h bei Raumtemperatur inkubiert. Nach dem Waschen wurde der Membran ECL Select Western Blotting Detection Reagent (GE Healthcare, GENERAL ELECRIC COMPANY) zugesetzt. Protein wurde unter Verwendung eines ImageQuant TM LAS 500 Imager (GE Healthcare, GENERAL ELECTRIC COMPANY) nachgewiesen.

Herstellung von Peptid

  • Pelletierte Elektrofahrzeuge wurden mit 40 μl 1 % RapiGest SF (Waters Corporation) in 50 mM Ammoniumbicarbonat (Honeywell Fluka, Thermo Fisher Scientific, Inc.), ergänzt mit 50 mM DTT, lysiert, gefolgt von einer 30-minütigen Inkubation bei 60 °C.
  • Nachdem man sie auf Raumtemperatur abkühlen ließ, wurden die lysierten Proben mit 4 &mgr;l 150 mM 2-Iodacetamid versetzt und 30 min im Dunkeln bei Raumtemperatur inkubiert. Die Lysate wurden mit 1 &mgr;g/ml Trypsin/Lys-C-Mischung, Mass Spec Grade (Promega Corporation) bei 37°C über Nacht inkubiert. Um das Detergens abzubauen, wurden 4 &mgr;l 10 % Trifluoressigsäure (Thermo Fisher Scientific, Inc.) zu der verdauten Mischung gegeben und 30 Minuten lang bei 37 °C inkubiert.
  • Nach 10-minütiger Zentrifugation bei 13.000 x g wurde der Überstand gesammelt und mit dem miVac-System (Genevac Ltd) lyophilisiert und mit Pierce C-18 Spin Columns gemäß den Anweisungen des Herstellers entsalzt. Erhaltene Peptide wurden mit 70 % Acetonitril eluiert, gefolgt von Gefriertrocknung und bis zur Verwendung bei –80°C gelagert.

Proteomanalyse mit LC-MS
Die erhaltenen Peptide wurden mit 20 ul Wasser rekonstituiert, das 0,1 % Ameisensäure (FA) enthielt (Fisher Chemical, Thermo Fisher Scientific, Inc.). Die proteomische Analyse der Peptide wurde auf Q Exactive (Thermo Fisher Scientific, Inc.), ausgestattet mit UltiMate 3000 Nano LC-Systemen (Thermo Fisher Scientific, Inc.), durchgeführt. Die Peptidprobe (2 μl) wurde auf eine Acclaim PepMap 1000-Trap-Säule (75 μm × 2 cm, nanoViper C18 3 μm, 100 Å, Thermo Fisher Scientific) injiziert, die in einer Kammer, die mit einem C18-Reverse verbunden war, auf 40 °C erhitzt wurde -Phasen-Aurora-UHPLC-Emittersäule mit Nano-Zero- und Captive-Spray-Einsatz (75 μm × 25 cm, Ion Opticks Pty Ltd) unter Verwendung der Dreamspray-Schnittstelle (AMR INCORPORATED). Die Flussrate der Nanopumpe wurde auf 250 nL/min mit einem Gradienten von 170 min eingestellt, wobei die mobilen Phasen A (0,1 % FA in Wasser, Fisher Chemical, Thermo Fisher Scientific, Inc.) und B (0,1 % FA in Acetonitril, Fisher Chemical) waren , Thermo Fisher Scientific, Inc.). Der Chromatographiegradient war so ausgelegt, dass er einen linearen Anstieg lieferte: 0–8 min bei 2 % B, 8–15 min von 2 % B auf 15 % B, 15–149 min von 15 % B auf 40 % B, 149–150 min von 40 % B bis 95 % B, Waschen, 8 min und 11 min Gleichgewicht. Die datenabhängige Akquisition wurde im Positiv-Ionen-Modus durchgeführt. Massenspektrometer-Parameter waren wie folgt: MS-Vollscan von m/z 350–1500 bei einer Auflösung von 70.000, AGC-Target 3 x e6, maximale Injektionszeit 100 ms und dd-MS2/dd-SIM-Parameter enthalten AGC-Target: 1 x e5, maximale Injektionszeit: 120 ms, TopN: 10 und Isolationsfenster 1,6 m/z. dd-Einstellungen waren Mindest-AGC von 2,5 x e3, Ladungsausschluss nicht zugewiesen, 1, 7, 8, >8, und dynamischer Ausschluss wurde auf 30 s eingestellt.

statistische Analyse
Zum Vergleich zwischen CD9-immunpräzipitierten Elektrofahrzeugen mit oder ohne EDEG wurden Proteine ​​in mindestens drei Läufen identifiziert und mit kennzeichnungsfreien Quantifizierungswerten (LFQ) unter Verwendung von Proteome Discoverer quantifiziert. Die LFQ-Parameter wurden auf den Normalisierungsmodus eingestellt: Gesamtpeptidmenge, Imputationsmodus: fehlender Wert: Resampling mit geringer Häufigkeit, Verhältnisberechnung: Basierend auf der summierten Häufigkeit.

Exo-Flow32 CD9 IP kit

EXOFLOW32A-CD9 SBI 32 reactions 585 EUR

Exo-Flow32 Tetra IP kit (CD9, CD63, CD81)

EXOFLOW32A-Tetra SBI 32 reactions 585 EUR

Exo-Flow32 CD63 IP kit

EXOFLOW32A-CD63 SBI 32 reactions 585 EUR

Exo-Flow32 CD81 IP kit

EXOFLOW32A-CD81 SBI 32 reactions 585 EUR

Exo-Flow96 CD9 IP kit

EXOFLOW96A-CD9 SBI 96 reactions 1554 EUR

Exo-Flow96 Tetra IP kit (CD9, CD63, CD81)

EXOFLOW96A-Tetra SBI 96 reactions 1554 EUR

Exo-Flow96 CD63 IP kit

EXOFLOW96A-CD63 SBI 96 reactions 1554 EUR

Exo-Flow96 CD81 IP kit

EXOFLOW96A-CD81 SBI 96 reactions 1554 EUR

ExoBrite™ 410/450 CD9 Flow Antibody (25 tests)

P003-410-125 Biotium 1UL 172 EUR

ExoBrite™ 410/450 CD9 Flow Antibody (100 tests)

P003-410-500 Biotium 1UL 575 EUR

ExoBrite™ 490/515 CD9 Flow Antibody (25 tests)

P003-490-125 Biotium 1UL 172 EUR

ExoBrite™ 490/515 CD9 Flow Antibody (100 tests)

P003-490-500 Biotium 1UL 575 EUR

ExoBrite™ 560/585 CD9 Flow Antibody (25 tests)

P003-560-125 Biotium 1UL 172 EUR

ExoBrite™ 560/585 CD9 Flow Antibody (100 tests)

P003-560-500 Biotium 1UL 575 EUR

ExoBrite™ 650/665 CD9 Flow Antibody (25 tests)

P003-650-125 Biotium 1UL 165 EUR

ExoBrite™ 650/665 CD9 Flow Antibody (100 tests)

P003-650-500 Biotium 1UL 550 EUR

ExoBrite™ R-PE CD9 Flow Antibody (25 tests)

P003-RPE-125 Biotium 1UL 172 EUR

ExoBrite™ R-PE CD9 Flow Antibody (100 tests)

P003-RPE-500 Biotium 1UL 575 EUR

Human CD9 Capture Beads for Flow Detection

9CB-25 ImmunoStep 25 test 220 EUR

CD9 Exo-Flow capture kit (Magnetic streptavidin beads, CD9-biotin capture antibody, Wash and Elution Buffers, Exo-FITC stain)

EXOFLOW100A-1 SBI 10 reactions 500 EUR

Exo-Flow 2.0 CD9 Analysis Kit (for Serum or Plasma)

EXOFLOW2-105A-SP SBI 10 rxn 705.6 EUR

Exo-Flow 2.0 CD9 Analysis Kit (for Tissue Culture Media)

EXOFLOW2-205A-TC SBI 10 rxn 705.6 EUR

Anti Human CD9 Flow Cytometry Monoclonal Clone HI9A Biotin

IMSAHUCD9HI9ACBL100UG Innovative research each 150 EUR

Anti Human CD9 Flow Cytometry Monoclonal Clone HI9A Biotin

IMSAHUCD9HI9ACBL25UG Innovative research each 60 EUR

Human IP-10 (CXCL10) Flow Cytometry Assay - Group 1

HX67121 Antigenix America 96 Tests 210 EUR

Mouse IP-10 (CXCL10) Flow Cytometry Assay - Group 1

MX83121 Antigenix America 96 Tests 240 EUR

Rat IP-10 Flow Cytometry Assay - Group 1 Panel B

RX68121 Antigenix America 96 Tests 270 EUR

Anti Human CD9 Flow Cytometry Monoclonal Clone HI9A PE Ready To Use

IMSAHUCD9HI9ACPE100 Innovative research each 209 EUR

Anti Human CD9 Flow Cytometry Monoclonal Clone HI9A PE Ready To Use

IMSAHUCD9HI9ACPE200 Innovative research each 285 EUR

Anti Human CD9 Flow Cytometry Monoclonal Clone HI9A APC Ready To Use

IMSAHUCD9HI9ACAPC100 Innovative research each 242 EUR

Anti Human CD9 Flow Cytometry Monoclonal Clone HI9A APC Ready To Use

IMSAHUCD9HI9ACAPC200 Innovative research each 330 EUR

Exo-Flow 2.0 Tetraspanin Combo Kit (CD63, CD9 & CD81) - for Serum or Plasma

EXOFLOW2-150A-SP SBI 30 rxn 1854 EUR

Anti Human CD9 Flow Cytometry Monoclonal Clone HI9A FITC Ready To Use

IMSAHUCD9HI9ACFITC100 Innovative research each 209 EUR

Anti Human CD9 Flow Cytometry Monoclonal Clone HI9A FITC Ready To Use

IMSAHUCD9HI9ACFITC200 Innovative research each 285 EUR

Anti Human CD9 Flow Cytometry Monoclonal Clone HI9A Conjugate/Tag Free

IMSAHUCD9HI9ACTF100UG Innovative research each 90 EUR

Anti Human CD9 Flow Cytometry Monoclonal Clone HI9A Conjugate/Tag Free

IMSAHUCD9HI9ACTF25UG Innovative research each 40 EUR

Exo-Flow 2.0 Tetraspanin Combo Kit (CD63, CD9 & CD81) - for Tissue Culture Media

EXOFLOW2-250A-TC SBI 30 rxn 1854 EUR

Anti Human CD9 Flow Cytometry Monoclonal Clone HI9A PE/Cyanine5 Ready To Use

IMSAHUCD9HI9ACPECY5100 Innovative research each 314 EUR

Anti Human CD9 Flow Cytometry Monoclonal Clone HI9A PE/Cyanine5 Ready To Use

IMSAHUCD9HI9ACPECY5200 Innovative research each 425 EUR

Anti Human CD9 Flow Cytometry Monoclonal Clone HI9A PE/Cyanine7 Ready To Use

IMSAHUCD9HI9ACPECY7100 Innovative research each 314 EUR

Anti Human CD9 Flow Cytometry Monoclonal Clone HI9A PE/Cyanine7 Ready To Use

IMSAHUCD9HI9ACPECY7200 Innovative research each 425 EUR

Anti Human CD9 Flow Cytometry Monoclonal Clone HI9A PerCP/Cyanine5.5 Ready To Use

IMSAHUCD9HI9ACPERCPCY55100 Innovative research each 314 EUR

Anti Human CD9 Flow Cytometry Monoclonal Clone HI9A PerCP/Cyanine5.5 Ready To Use

IMSAHUCD9HI9ACPERCPCY55200 Innovative research each 425 EUR

Non-Human Primate IP-10 (CXCL10) Flow Cytometry Assay - Group 1

PX70121 Antigenix America 96 Tests 270 EUR

ExoBrite™ 410/450 CD63 Flow Antibody (25 tests)

P004-410-125 Biotium 1UL 172 EUR

ExoBrite™ 410/450 CD63 Flow Antibody (100 tests)

P004-410-500 Biotium 1UL 575 EUR

ExoBrite™ 490/515 CD63 Flow Antibody (25 tests)

P004-490-125 Biotium 1UL 172 EUR

ExoBrite™ 490/515 CD63 Flow Antibody (100 tests)

P004-490-500 Biotium 1UL 575 EUR

ExoBrite™ 560/585 CD63 Flow Antibody (25 tests)

P004-560-125 Biotium 1UL 172 EUR

ExoBrite™ 560/585 CD63 Flow Antibody (100 tests)

P004-560-500 Biotium 1UL 575 EUR

ExoBrite™ 410/450 CD81 Flow Antibody (25 tests)

P005-410-125 Biotium 1UL 172 EUR

ExoBrite™ 410/450 CD81 Flow Antibody (100 tests)

P005-410-500 Biotium 1UL 575 EUR

ExoBrite™ 490/515 CD81 Flow Antibody (25 tests)

P005-490-125 Biotium 1UL 172 EUR

ExoBrite™ 490/515 CD81 Flow Antibody (100 tests)

P005-490-500 Biotium 1UL 575 EUR

ExoBrite™ 560/585 CD81 Flow Antibody (25 tests)

P005-560-125 Biotium 1UL 172 EUR

ExoBrite™ 560/585 CD81 Flow Antibody (100 tests)

P005-560-500 Biotium 1UL 575 EUR

Tetraspanin Exo-Flow Combo capture kit (Magnetic streptavidin beads, CD9, CD63, and CD81-biotin capture antibodies, Wash and Elution Buffers, Exo-FITC stain)

EXOFLOW150A-1 SBI 10 reactions 760 EUR

Flow2000

ABL-TC0207 AcceGen 1 vial Ask for price

ExoBrite™ R-PE CD63 Flow Antibody (25 tests)

P004-RPE-125 Biotium 1UL 172 EUR

ExoBrite™ R-PE CD63 Flow Antibody (100 tests)

P004-RPE-500 Biotium 1UL 575 EUR

ExoBrite™ R-PE CD81 Flow Antibody (25 tests)

P005-RPE-125 Biotium 1UL 172 EUR

ExoBrite™ R-PE CD81 Flow Antibody (100 tests)

P005-RPE-500 Biotium 1UL 575 EUR

Exo-BAP Kit*

E1011-01 EURx 100reactions 42.51 EUR

Exo-BAP Kit*

E1011-02 EURx 500reactions 203.83 EUR

ExoFlow-ONE EV Labeling Kit for Flow Cytometry (Ruby Red)

EXOF100A-1 SBI 25 reactions 418 EUR

FLOW IntraCellular Staining Kit (IC FLOW)

MBS668927-1Kit MyBiosource 1Kit 270 EUR

FLOW IntraCellular Staining Kit (IC FLOW)

MBS668927-5x1Kit MyBiosource 5x1Kit 1220 EUR

ExoFlow-ONE EV Labeling Kit for Flow Cytometry (Garnet Far Red)

EXOF200A-1 SBI 25 reactions 418 EUR

ExoFlow-ONE EV Labeling Kit for Flow Cytometry (Emerald Green)

EXOF300A-1 SBI 25 reactions 418 EUR

ExoFlow-ONE EV Labeling Kit for Flow Cytometry (Sapphire Blue)

EXOF400A-1 SBI 25 reactions 418 EUR

ExoFlow-ONE EV Labeling Kit for Flow Cytometry (Citrine Yellow)

EXOF500A-1 SBI 25 reactions 418 EUR

r3610 kit ph + flowcell

R3610PF Consort ea 1269.6 EUR

Exo-1

527816 MedKoo Biosciences 10.0mg Ask for price

Exo-1

T9200-10mg TargetMol Chemicals 10mg Ask for price

Exo-1

T9200-1g TargetMol Chemicals 1g Ask for price

Exo-1

T9200-1mg TargetMol Chemicals 1mg Ask for price

Exo-1

T9200-50mg TargetMol Chemicals 50mg Ask for price

Exo-1

T9200-5mg TargetMol Chemicals 5mg Ask for price

FlowFAST H 09 Reverse Flow Laminar Flow Hood - EACH

CAB1636 Scientific Laboratory Supplies EACH 12885.78 EUR

FlowFAST H 12 Reverse Flow Laminar Flow Hood - EACH

CAB1638 Scientific Laboratory Supplies EACH 13471.83 EUR

FlowFAST H 15 Reverse Flow Laminar Flow Hood - EACH

CAB1640 Scientific Laboratory Supplies EACH 16983.73 EUR

FlowFAST H 18 Reverse Flow Laminar Flow Hood - EACH

CAB1642 Scientific Laboratory Supplies EACH 18161.71 EUR

Exo-FlowMag96

EXOFLOWMAG-1 SBI 1 Kit 634 EUR

r3610 kit ph/orp + flowcell

R3610POF Consort ea 1401.6 EUR

Mito Flow - 100 Tests

Flo200-2 Cell Technology 100 Tests 270 EUR

Mito Flow - 500 Tests

Flo200-3 Cell Technology 500 Tests 525 EUR

HIGH FLOW KIT FOR PE TANKS - EACH

HIFL0TKPE Scientific Laboratory Supplies EACH 205.63 EUR

Exo-Fect Exosome Transfection Kit

EXFT10A-1 SBI 10 reactions 238 EUR

Exo-Fect Exosome Transfection Kit

EXFT20A-1 SBI 20 reactions 429 EUR

RIOS/ELIX-L FLOW METER KIT - EACH

ZLXFL0WKT Scientific Laboratory Supplies EACH 577.24 EUR

APO-BRDU FLOW CYTOMETRY KIT

GWB-Q00436 GenWay Biotech 60 TESTS Ask for price

exo-Norborneol

N661275 Toronto Research Chemicals 100mg 58 EUR

CM Sepharose Fast Flow 500mL

17071901 Scientific Laboratory Supplies EACH 751.26 EUR

CM SEPHAROSE FAST FLOW, 500 ML - EACH

GE17-0719-01 Scientific Laboratory Supplies EACH 862.65 EUR

exo-Granisetron

G780010 Toronto Research Chemicals 100mg 219 EUR

CellSurface FLOW Staining Kit

MBS668926-1Kit MyBiosource 1Kit 200 EUR

CellSurface FLOW Staining Kit

MBS668926-5x1Kit MyBiosource 5x1Kit 900 EUR

Q Sepharose Fast Flow 300mL - EACH

17051001 Scientific Laboratory Supplies EACH 857.25 EUR

CM Sepharose Fast Flow 500mL - EACH

17070901 Scientific Laboratory Supplies EACH 889.65 EUR

SP Sepharose Fast Flow 300mL - EACH

17072901 Scientific Laboratory Supplies EACH 795.15 EUR

Ni Sepharose 6 Fast Flow 100mL - EACH

17531802 Scientific Laboratory Supplies EACH 1844.1 EUR

Ni Sepharose 6 Fast Flow 500mL - EACH

17531803 Scientific Laboratory Supplies EACH 7699.05 EUR

T-2 (T-2 Toxin) Lateral Flow Assay Kit

MBS2563686-50Tests MyBiosource 50Tests 285 EUR

T-2 (T-2 Toxin) Lateral Flow Assay Kit

MBS2563686-5x50Tests MyBiosource 5x50Tests 1300 EUR

Butyl Sepharose 4 Fast Flow 200mL

17098010 Scientific Laboratory Supplies EACH 189.24 EUR

FF (Florfenicol) Lateral Flow Assay Kit

MBS2563651-50Tests MyBiosource 50Tests 390 EUR

FF (Florfenicol) Lateral Flow Assay Kit

MBS2563651-5x50Tests MyBiosource 5x50Tests 1770 EUR

Exo-Urine EV Isolation Kit

EXOU100A-1 SBI 2 x 5 reactions 490 EUR

IMAC Sepharose 6 Fast Flow 100mL - EACH

17092108 Scientific Laboratory Supplies EACH 1401.3 EUR

DISTRIBUTION KIT MEDIUM FLOW - EACH

ZAFDISKT2 Scientific Laboratory Supplies EACH 2046.04 EUR

FlowFAST H 09 Laminar Flow Cabinet - EACH

CAB1606 Scientific Laboratory Supplies EACH 10158.22 EUR

FlowFAST V 15 Laminar Flow Cabinet - EACH

CAB1608 Scientific Laboratory Supplies EACH 14492.65 EUR

FlowFAST V 18 Laminar Flow Cabinet - EACH

CAB1614 Scientific Laboratory Supplies EACH 15937.95 EUR

Octyl Sepharose 4 Fast Flow 200mL - EACH

17094602 Scientific Laboratory Supplies EACH 918 EUR

Butyl Sepharose 4 Fast Flow 200mL - EACH

17098001 Scientific Laboratory Supplies EACH 918 EUR

Human CD73 Flow Cytomtry Asay

HX87540 Antigenix America 96 tests 310 EUR

Butyl-S Sepharose 6 Fast Flow. 200mL - EACH

17097802 Scientific Laboratory Supplies EACH 936.9 EUR

Protein G Sepharose 4 Fast Flow 200mL - EACH

17061805 Scientific Laboratory Supplies EACH 6149.25 EUR

FB1 (Fumonisin B1) Lateral Flow Assay Kit

MBS2563684-50Tests MyBiosource 50Tests 285 EUR

FB1 (Fumonisin B1) Lateral Flow Assay Kit

MBS2563684-5x50Tests MyBiosource 5x50Tests 1300 EUR

Human Exodus-2/CCL21 Flow Cytometry Assay - Group 6

HX87211 Antigenix America 96 Tests 270 EUR

(+/-)-Exo-6-Hydroxytropinone

abx187950-1g Abbexa 1 g 343.2 EUR

(+/-)-Exo-6-hydroxytropinone

E975135 Toronto Research Chemicals 100mg 65 EUR

AFM1 (Aflatoxin M1) Lateral Flow Assay Kit

MBS2563683-50Tests MyBiosource 50Tests 285 EUR

AFM1 (Aflatoxin M1) Lateral Flow Assay Kit

MBS2563683-5x50Tests MyBiosource 5x50Tests 1300 EUR

OTA (Ochratoxin A) Lateral Flow Assay Kit

MBS2563685-50Tests MyBiosource 50Tests 285 EUR

OTA (Ochratoxin A) Lateral Flow Assay Kit

MBS2563685-5x50Tests MyBiosource 5x50Tests 1300 EUR

exo-2,3-Norbornanedicarboximide

N661230 Toronto Research Chemicals 500mg 1777 EUR

MG (Malachite Green) Lateral Flow Assay Kit

MBS2563652-20Tests MyBiosource 20Tests 250 EUR

MG (Malachite Green) Lateral Flow Assay Kit

MBS2563652-5x20Tests MyBiosource 5x20Tests 1145 EUR

Glutathione Sepharose 4 Fast Flow 100mL - EACH

17513202 Scientific Laboratory Supplies EACH 2862 EUR

Glutathione Sepharose 4 Fast Flow 500mL - EACH

17513203 Scientific Laboratory Supplies EACH 11237.4 EUR

Human IFN-γ Kit (Flow Cytometry Beads Assay)

CFA-C001 ACROBIOSYSTEMS 96tests 342.4 EUR

Rotavirus Antigen Lateral Flow Assay Kit

MBS2567964-40Tests MyBiosource 40Tests 305 EUR

Rotavirus Antigen Lateral Flow Assay Kit

MBS2567964-5x40Tests MyBiosource 5x40Tests 1380 EUR

GenUP Exo SAP Kit (2000 reactions)

BRBR0701803 Westburg each 1449.7 EUR

Rat CD9 antigen(CD9) ELISA kit

E01A11745 BlueGene 96T 700 EUR

Rat CD9 antigen(CD9) ELISA kit

E02C1499-192T BlueGene 192 tests 1524 EUR

Rat CD9 antigen(CD9) ELISA kit

E02C1499-48 BlueGene 1 plate of 48 wells 624 EUR

Rat CD9 antigen(CD9) ELISA kit

E02C1499-96 BlueGene 1 plate of 96 wells 822 EUR

Dog CD9 antigen(CD9) ELISA kit

E08C1499-192T BlueGene 192 tests 1524 EUR

Dog CD9 antigen(CD9) ELISA kit

E08C1499-48 BlueGene 1 plate of 48 wells 624 EUR

Dog CD9 antigen(CD9) ELISA kit

E08C1499-96 BlueGene 1 plate of 96 wells 822 EUR

Pig CD9 antigen(CD9) ELISA kit

E07C1499-192T BlueGene 192 tests 1524 EUR

Pig CD9 antigen(CD9) ELISA kit

E07C1499-48 BlueGene 1 plate of 48 wells 624 EUR

Pig CD9 antigen(CD9) ELISA kit

E07C1499-96 BlueGene 1 plate of 96 wells 822 EUR

Rat CD9 Antigen (CD9) ELISA Kit

abx505821-96tests Abbexa 96 tests 687.5 EUR

Pig CD9 / CD9 antigen ELISA Kit

E15351p EIAab 96T 900 EUR

Rat Cd9 / CD9 antigen ELISA Kit

E15351r EIAab 96T 796 EUR

Rat CD9 antigen (CD9) ELISA Kit

MBS7203342-10x96StripWells MyBiosource 10x96-Strip-Wells 5685 EUR

Rat CD9 antigen (CD9) ELISA Kit

MBS7203342-48StripWells MyBiosource 48-Strip-Wells 485 EUR

Rat CD9 antigen (CD9) ELISA Kit

MBS7203342-5x96StripWells MyBiosource 5x96-Strip-Wells 3020 EUR

Rat CD9 antigen (CD9) ELISA Kit

MBS7203342-96StripWells MyBiosource 96-Strip-Wells 690 EUR

Mediane der erhaltenen normalisierten Häufigkeiten jedes identifizierten Proteins, Mediane von Proteinen zwischen zwei Probengruppen, log2, -log10, p-Wert und fold change wurden unter Verwendung von Microsoft Excel berechnet und durch Volcano-Diagramme unter Verwendung von R (Version 3.5.3) visualisiert.

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