Humane Phosphoserinaminotransferase 1 (PSAT1)

Abstrakt
Hintergrund/Ziele: Phosphoserin-Aminotransferase 1 (PSAT1) wird in vielen Karzinomgeweben überexprimiert, jedoch ist wenig über ihre Expression und Funktion bei der Karzinogenese des Ösophagus bekannt. Diese Studie untersuchte die Expression von PSAT1 in Geweben des menschlichen Plattenepithelkarzinoms des Ösophagus (ESCC), um die Beziehung zwischen PSAT1-Expression und klinisch-pathologischen Faktoren zu bestimmen.

Methoden: Die Expression von PSAT1 in 64 chirurgischen Resektionen von Ösophagus-Karzinogenese-Patienten wurde durch quantitative RT-PCR und Immunhistochemie untersucht und die Ergebnisse wurden mit klinisch-pathologischen Faktoren verglichen. In-vitro-Experimente wurden in ESCC-Zellen durchgeführt, die PSAT1 überexprimieren, um die Zelllebensfähigkeit und -invasion zu messen. Die Tumorbildung in vivo wurde durch subkutane Injektion von Tumorzellen in immungeschwächte Mäuse untersucht.

Ergebnisse: Die PSAT1-Expression war in ESCC-Geweben im Vergleich zu normalen Ösophagusgeweben erhöht. Eine erhöhte PSAT1-Expression war signifikant mit dem Krankheitsstadium, Lymphknotenmetastasen, Fernmetastasen und einer schlechten Prognose assoziiert. In vitro förderte PSAT1-Überexpression die ESCC-Zellproliferation und Matrigel-Invasion. In vivo verstärkte die Injektion von PSAT1-überexprimierenden ECSS-Zellen in Mäuse die Tumorbildung. Die Western-Blot-Analyse zeigte, dass PSAT1 die Expression und/oder Aktivität von GSK3β/Snail hochregulierte. Schlussfolgerung: PSAT1 spielt eine entscheidende Rolle bei der Entwicklung von ESCC und sagt ein schlechtes Überleben voraus. Daher könnte PSAT1 ein vielversprechendes neues therapeutisches Ziel gegen Krebs sein.

Einführung

Speiseröhrenkrebs ist eine besonders aggressive bösartige Erkrankung mit einer hohen Sterblichkeitsrate. Es ist weltweit die achthäufigste Krebsart und die sechsthäufigste krebsbedingte Todesursache [1,2,3,4]. Diese Art von Krebs ist bei Männern etwa viermal häufiger als bei Frauen, und es gibt sehr unterschiedliche Häufigkeiten zwischen den Ländern, wobei China etwa die Hälfte aller Fälle ausmacht [5,6]. Es gibt zwei Hauptursachen für Speiseröhrenkrebs, das Plattenepithelkarzinom des Ösophagus (ESCC) und das Adenokarzinom des Ösophagus (EAC). ESCC stammt von Epithelzellen, die die Speiseröhre auskleiden, während EAC aus Drüsenzellen im unteren Drittel der Speiseröhre entsteht. ESCC ist die vorherrschende Ursache für Speiseröhrenkrebs und für etwa 60–70 % aller Fälle von Speiseröhrenkrebs weltweit verantwortlich, während EAC 20–30 % ausmacht, und eine Reihe weniger häufiger Arten auftreten. Die Inzidenz von EAC nimmt jedoch stetig zu [7,8]. Jeder Faktor, der chronische Reizungen und Entzündungen verursacht, erhöht das ESCC-Risiko, und Tabak- und Alkoholkonsum gelten daher als die primären Risikofaktoren für ESCC [9,10]. Im Gegensatz dazu ist Adipositas häufig mit EAC verbunden, und die erhöhte Prävalenz von Adipositas entspricht der erhöhten Inzidenz von EAC [11,12]. Die Behandlung richtet sich nach dem Stadium und dem Ort des Krebses, und die klinischen Ergebnisse hängen vom Ausmaß der Erkrankung ab, sind jedoch im Allgemeinen schlecht, da die Diagnose bei dieser Krebsart oft spät erfolgt.

Der Metabolismus von Serin und Glycin spielt eine wichtige Rolle bei der Zellproliferation, da diese Aminosäuren wesentliche Vorläufer für die Makromolekülsynthese und wichtig für die Aufrechterhaltung des zellulären Redoxzustands sind.
In den letzten Jahren wurde eine Hyperaktivierung des Serin/Glycin-Stoffwechselwegs mit der Krebsentstehung in Verbindung gebracht [13]. Es wurde vermutet, dass die selektive Expression einiger metabolischer Enzyme als prognostischer Faktor für Krebs fungiert [14].
Serin wird über eine dreistufige Reaktion synthetisiert: (1) die Umwandlung von 3-Phosphoglycerat in 3-Phosphohydroxypuruvat, katalysiert durch Phosphoglyceratdehydrogenase (PHGDH), (2) die Umwandlung von 3-Phosphohydroxypuruvat in Phosphoserin durch das Enzym Phosphoserinphosphatase (PSPH). ) und (3) die Umwandlung von Phosphoserin in Serin durch Phosphoserinaminotransferase (PSAT1).
Es wurde gezeigt, dass das Enzym, das den ersten Schritt im Serin-Biosyntheseweg katalysiert, PHGDH, einen prognostischen Wert bei der Vorhersage des Überlebens von Patienten in Bezug auf Brustkrebs, aber nicht auf Lungenkrebs hat, was darauf hinweist, dass andere Mechanismen bei anderen Krebsarten, möglicherweise anderen, eingesetzt werden können Enzyme des Serinstoffwechsels [14].
Es wurde gezeigt, dass PSAT1 die Zellproliferation und Chemoresistenz in vitro fördert [15,16] und dieses Enzym wurde eng mit der Tumorentstehung bei Dickdarmkrebs, Brustkrebs und nicht-kleinzelligem Lungenkrebs in Verbindung gebracht, indem es den Zellzyklus reguliert [17,18,19 ,20]. Es gibt Hinweise darauf, dass PSAT1 während der Karzinogenese als proproliferativer und überlebensfördernder Faktor fungieren könnte. Noch weniger ist über die Expression und den zugrunde liegenden Mechanismus bekannt, durch den PSAT1 zur ESCC-Entwicklung und -Progression beiträgt.

Unsere früheren Studien ergaben, dass PSAT1 als direktes Ziel von miR-340 zum Fortschreiten und zur Invasivität von ESCC beitragen kann [21]. In dieser Studie analysieren wir die Rolle von PSAT1 bei der Entwicklung von ESCC und untersuchen die Beziehung zwischen PSAT1-Expression und klinisch-pathologischen Faktoren, einschließlich der Patientenprognose. Zusammengenommen identifizieren unsere Daten PSAT1 als potenzielles neues therapeutisches Ziel bei Speiseröhrenkrebs.

Materialen und Methoden

Patienten und Gewebeproben

Patienten, die für diese Studie ausgewählt wurden, wurden von 2004 bis 2007 im Tongren Hospital mit ESCC diagnostiziert und vor der Verabreichung einer Chemotherapie einer Speiseröhrenkrebsresektion unterzogen. ESCC und Karzinom-benachbarte Gewebe wurden unmittelbar nach der chirurgischen Resektion gesammelt und von erfahrenen Pathologen bestätigt. Alle Proben wurden in der Gewebebank des Tongren-Krankenhauses der Shanghai Jiaotong University School of Medicine hinterlegt und gemäß den lokalen ethischen Richtlinien (wie in der Deklaration von Helsinki festgelegt) anonym kodiert. Von allen Patienten wurde eine schriftliche Einverständniserklärung nach Aufklärung eingeholt, und das Protokoll wurde vom Review Board der Shanghai Jiaotong University School of Medicine genehmigt (Genehmigungsnummer: 20120614-XF). ESCC-Proben wurden gemäß den Klassifikationsrichtlinien des American Joint Cancer Committee/Union Internationale Contre le Cancer (UICC/AJCC) eingeteilt. Die Einstufung und histopathologische Subtypisierung von ESCC-Proben basierte auf den Kriterien der Weltgesundheitsorganisation. Vierundsechzig ESCC-Biopsieproben und ihre angrenzenden passenden nicht krebsartigen Ösophagusgewebe wurden manuell präpariert, um Bindegewebe zu entfernen, und wurden dann sofort bis zur weiteren Verwendung in flüssigem Stickstoff gelagert.

Zelllinien und Kulturbedingungen

Eine unsterblich gemachte humane Ösophagus-Plattenepithelzelllinie (HET-1A) wurde von einer Kultursammlung amerikanischen Typs erworben und in RPMI-1640-Medium (Gibco, Carlsbad, CA, USA), ergänzt mit 10 % fötalem Rinderserum (FBS, Gibco), gezüchtet. Menschliche embryonale HEK293T-Nierenzellen und drei ESCC-Zelllinien (EC1, EC109, EC9706) wurden von der Chinese Academy of Medical Science (Shanghai, China) erworben und routinemäßig in Dulbeccos modifiziertem Eagle-Medium (DMEM) oder RPMI-1640-Medium (Gibco ) ergänzt mit 10 % fötalem Rinderserum, 100 Einheiten/ml Penicillin G und 100 µg/ml Streptomyc bei 37 °C in befeuchteter Luft mit 5 % CO2.

Quantitative Echtzeit-PCR

Die gesamte zelluläre RNA wurde aus Zellen unter Verwendung von Trizol (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) gemäß dem Protokoll des Herstellers isoliert. RNA wurde mit RNase-freiem Wasser eluiert, bei einer Extinktion bei 260/280 nm quantifiziert und für die reverse Transkription verwendet. cDNA wurde durch Oligo(dT)-Priming unter Verwendung des RevertAidTM First Strand cDNA Synthesis Kit (Fermentas, Burlington, ON, Kanada) gemäß den Anweisungen des Herstellers synthetisiert. Quantitative Echtzeit-PCR wurde unter Verwendung eines kommerziellen SYBR-Green-Master-Mix-Kits (Takara, Tokyo, Japan) und eines Prism 7900 Sequence Detection System (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) durchgeführt. GAPDH wurde als interne Kontrolle mitgeführt. Jede Probe wurde dreifach gemessen. Primer und Sonden für die quantitative Echtzeit-PCR wurden von Applied Biosystems erworben. Die Primersequenzen für PSAT1 waren F: 5′-GGCCAGTTCAGTGCTGTCC-3′ und R: 5′-GCTCCTGTCACCACATAGTCA-3′, und für GAPDH waren F: 5′-CTGGGCTACACTGAGCACC-3′ und R: 5′-AAGTGGTCGTTGAGGGCAATG-3′.

Plasmidkonstrukte und lentivirale Transduktion

Um den lentiviralen Vektor pCDH-PSAT1 zu erzeugen, der PSAT1 überexprimiert, wurde die vollständige codierende Sequenz durch PCR aus HEK293T-Zell-cDNA amplifiziert und dann in die BamHI/EcoRI-Stellen des pCDH-CMV-EF1-copGFP-Vektors (SBI, Mountain View, CA , USA) unter Verwendung der folgenden Primer: Vorwärtsprimer, 5′-AAAGAATTCATGGACGCCCCCAGGCAG-3′; Reverse-Primer: 5′-AAAGGATCCTCATAGCTGATGCATCTCCAAAA AT-3′. Die korrekten Insertionen wurden durch DNA-Sequenzierung bestätigt.oder der Produktion viraler Partikel wurde das Lentivirus-vermittelte PSAT1-Verpackungssystem, enthaltend pCDH-CMV-EF1-copGFP oder pCDH-PSAT1, mit Rec, TAT, Gag und Vsvg in HEK293T-Zellen mit Lipofectamine™ 2000 (Invitrogen) gemäß Herstellerangaben kotransfiziert Anweisungen. Der die Virusquelle enthaltende Überstand wurde 60 h nach der Transfektion gesammelt und durch einen Filter mit einer Porengröße von 0,45 &mgr;m (Millipore, Bedford, MA, USA) geleitet.

Human Phosphoserine Aminotransferase 1 (PSAT1) ELISA Kit
DLR-PSAT1-Hu-48T	DL Develop	48T	620.4 EUR
Human Phosphoserine Aminotransferase 1 (PSAT1) ELISA Kit
DLR-PSAT1-Hu-96T	DL Develop	96T	807.6 EUR
Human Phosphoserine Aminotransferase 1 (PSAT1) ELISA Kit
RD-PSAT1-Hu-48Tests	Reddot Biotech	48 Tests	625.2 EUR
Human Phosphoserine Aminotransferase 1 (PSAT1) ELISA Kit
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Human Phosphoserine Aminotransferase 1 (PSAT1) ELISA Kit
RDR-PSAT1-Hu-48Tests	Reddot Biotech	48 Tests	652.8 EUR
Human Phosphoserine Aminotransferase 1 (PSAT1) ELISA Kit
RDR-PSAT1-Hu-96Tests	Reddot Biotech	96 Tests	907.2 EUR
Mouse Phosphoserine aminotransferase (Psat1)
1-CSB-EP860801MO	Cusabio	606.00 EUR 318.00 EUR 2192.40 EUR 919.20 EUR 1461.60 EUR 402.00 EUR	100ug 10ug 1MG 200ug 500ug 50ug
Phosphoserine Aminotransferase 1 (PSAT1) Antibody
20-abx174061	Abbexa	1028.40 EUR 526.80 EUR	1 mg 200 ug
Phosphoserine Aminotransferase 1 (PSAT1) Antibody
abx122046-100ug	Abbexa	100 ug	469.2 EUR
Phosphoserine Aminotransferase 1 (PSAT1) Antibody
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Phosphoserine Aminotransferase 1 (PSAT1) Antibody
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Phosphoserine Aminotransferase 1 (PSAT1) Antibody
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Phosphoserine Aminotransferase 1 (PSAT1) Antibody
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Phosphoserine Aminotransferase 1 (PSAT1) Antibody
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Phosphoserine Aminotransferase 1 (Psat1) Antibody
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Phosphoserine Aminotransferase 1 (PSAT1) Antibody
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Phosphoserine Aminotransferase 1 (PSAT1) Antibody
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Recombinant Phosphoserine Aminotransferase 1 (PSAT1)
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PSAT1 Antibody / Phosphoserine aminotransferase
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Human Phosphoserine Aminotransferase 1 (PSAT1) Protein
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Phosphoserine Aminotransferase 1 (PSAT1) Antibody (HRP)
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Phosphoserine Aminotransferase 1 (PSAT1) Antibody (FITC)
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Phosphoserine Aminotransferase 1 (Psat1) Antibody (HRP)
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Phosphoserine Aminotransferase 1 (Psat1) Antibody (FITC)
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Phosphoserine Aminotransferase 1 (Psat1) Antibody (Biotin)
20-abx319234	Abbexa	493.20 EUR 2214.00 EUR 718.80 EUR 218.40 EUR 360.00 EUR	100 ug 1 mg 200 ug 20 ug 50 ug
Anti-Phosphoserine Aminotransferase/PSAT1 Antibody
PB10086	BosterBio	100ug/vial	400.8 EUR
Human Phosphoserine Aminotransferase 1 (PSAT1) ELISA Kit
20-abx152870	Abbexa	8853.60 EUR 4719.60 EUR 1093.20 EUR	10 × 96 tests 5 × 96 tests 96 tests
Human Phosphoserine Aminotransferase 1 (PSAT1) CLIA Kit
20-abx190183	Abbexa	9493.20 EUR 5058.00 EUR 1167.60 EUR	10 × 96 tests 5 × 96 tests 96 tests
PSAT1 Phosphoserine Aminotransferase 1 Human Recombinant Protein
PROTQ9Y617	BosterBio	Regular: 20ug	380.4 EUR
Human Phosphoserine Aminotransferase 1(PSAT1)ELISA Kit
QY-E02294	Qayee Biotechnology	96T	480 EUR
Human Phosphoserine Aminotransferase 1 (PSAT1) ELISA Kit
SED861Hu-10x96wellstestplate	Cloud-Clone	10x96-wells test plate	5677.8 EUR
Human Phosphoserine Aminotransferase 1 (PSAT1) ELISA Kit
SED861Hu-1x48wellstestplate	Cloud-Clone	1x48-wells test plate	572.76 EUR
Human Phosphoserine Aminotransferase 1 (PSAT1) ELISA Kit
SED861Hu-1x96wellstestplate	Cloud-Clone	1x96-wells test plate	766.8 EUR
Human Phosphoserine Aminotransferase 1 (PSAT1) ELISA Kit
SED861Hu-5x96wellstestplate	Cloud-Clone	5x96-wells test plate	3090.6 EUR
Human Phosphoserine Aminotransferase 1 (PSAT1) ELISA Kit
4-SED861Hu	Cloud-Clone	5738.40 EUR 3031.20 EUR 768.00 EUR	10 plates of 96 wells 5 plates of 96 wells 1 plate of 96 wells
Human Phosphoserine Aminotransferase 1 (PSAT1)CLIA Kit
SCD861Hu-10x96wellstestplate	Cloud-Clone	10x96-wells test plate	6777.36 EUR
Human Phosphoserine Aminotransferase 1 (PSAT1)CLIA Kit
SCD861Hu-1x48wellstestplate	Cloud-Clone	1x48-wells test plate	663.31 EUR
Human Phosphoserine Aminotransferase 1 (PSAT1)CLIA Kit
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Human Phosphoserine Aminotransferase 1 (PSAT1) CLIA Kit
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Human Phosphoserine aminotransferase, PSAT1 ELISA KIT
ELI-30408h	Lifescience Market	96 Tests	988.8 EUR
Mouse Phosphoserine Aminotransferase 1 (PSAT1) ELISA Kit
abx390237-96tests	Abbexa	96 tests	1093.2 EUR
ELISA kit for Human PSAT1 (Phosphoserine Aminotransferase 1)
ELK4094	ELK Biotech	1 plate of 96 wells	518.4 EUR
Mouse Phosphoserine aminotransferase, Psat1 ELISA KIT
ELI-42287m	Lifescience Market	96 Tests	1038 EUR
Rabbit Phosphoserine aminotransferase, PSAT1 ELISA KIT
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ELISA kit for Human Phosphoserine aminotransferase (PSAT1)
KTE61093-48T	Abbkine	48T	398.4 EUR
ELISA kit for Human Phosphoserine aminotransferase (PSAT1)
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ELISA kit for Human Phosphoserine aminotransferase (PSAT1)
KTE61093-96T	Abbkine	96T	646.8 EUR
Phosphoserine Aminotransferase 1 (PSAT1) Polyclonal Antibody (Human, Mouse, Pig)
4-PAD861Hu01	Cloud-Clone	296.40 EUR 3012.00 EUR 750.00 EUR 372.00 EUR 256.80 EUR	100ul 10ml 1ml 200ul 20ul
Phosphoserine Aminotransferase 1 (PSAT1) Polyclonal Antibody (Human, Mouse, Pig), APC
4-PAD861Hu01-APC	Cloud-Clone	414.00 EUR 3930.00 EUR 1094.40 EUR 528.00 EUR 262.80 EUR	100ul 10ml 1ml 200ul 20ul
Phosphoserine Aminotransferase 1 (PSAT1) Polyclonal Antibody (Human, Mouse, Pig), Biotinylated
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Phosphoserine Aminotransferase 1 (PSAT1) Polyclonal Antibody (Human, Mouse, Pig), Cy3
4-PAD861Hu01-Cy3	Cloud-Clone	502.80 EUR 5190.00 EUR 1410.00 EUR 654.00 EUR 301.20 EUR	100ul 10ml 1ml 200ul 20ul
Phosphoserine Aminotransferase 1 (PSAT1) Polyclonal Antibody (Human, Mouse, Pig), FITC
4-PAD861Hu01-FITC	Cloud-Clone	355.20 EUR 3168.00 EUR 900.00 EUR 446.40 EUR 234.00 EUR	100ul 10ml 1ml 200ul 20ul
Phosphoserine Aminotransferase 1 (PSAT1) Polyclonal Antibody (Human, Mouse, Pig), HRP
4-PAD861Hu01-HRP	Cloud-Clone	379.20 EUR 3426.00 EUR 968.40 EUR 477.60 EUR 247.20 EUR	100ul 10ml 1ml 200ul 20ul
Phosphoserine Aminotransferase 1 (PSAT1) Polyclonal Antibody (Human, Mouse, Pig), PE
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Psat1 ELISA Kit\| Mouse Phosphoserine aminotransferase ELISA Kit
EF015876	Lifescience Market	96 Tests	826.8 EUR
Phosphoserine Aminotransferase 1 (PSAT1) Polyclonal Antibody (Human, Mouse, Pig), APC-Cy7
4-PAD861Hu01-APC-Cy7	Cloud-Clone	685.20 EUR 7716.00 EUR 2046.00 EUR 912.00 EUR 382.80 EUR	100ul 10ml 1ml 200ul 20ul
Phosphoserine Aminotransferase 1 (Recombinant)
20-abx073256	Abbexa	4101.60 EUR 393.60 EUR 276.00 EUR	1 mg 20 ug 5 ug
Human Phosphoserine Phosphatase (PSP) AssayMax ELISA Kit
EP2530-1	AssayPro	96 Well Plate	500.4 EUR
Recombinant Mouse Phosphoserine aminotransferase Protein, His-SUMO, E.coli-100ug
QP8039-ec-100ug	EnQuireBio	100ug	685.2 EUR
Recombinant Mouse Phosphoserine aminotransferase Protein, His-SUMO, E.coli-10ug
QP8039-ec-10ug	EnQuireBio	10ug	326.4 EUR
Recombinant Mouse Phosphoserine aminotransferase Protein, His-SUMO, E.coli-1mg
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Recombinant Mouse Phosphoserine aminotransferase Protein, His-SUMO, E.coli-200ug
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Recombinant Mouse Phosphoserine aminotransferase Protein, His-SUMO, E.coli-500ug
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Recombinant Mouse Phosphoserine aminotransferase Protein, His-SUMO, E.coli-50ug
QP8039-ec-50ug	EnQuireBio	50ug	434.4 EUR
PSAT1 Antibody
1-CSB-PA018838GA01HU	Cusabio	716.40 EUR 399.60 EUR	150ul 50ul
PSAT1 Antibody
1-CSB-PA018838LA01HU	Cusabio	380.40 EUR 402.00 EUR	100ug 50ug
Psat1 Antibody
1-CSB-PA860801HA01MO	Cusabio	380.40 EUR 402.00 EUR	100ug 50ug
Human Phosphoserine phosphatase (PSPH)
1-CSB-EP018938HU	Cusabio	456.00 EUR 256.80 EUR 1570.80 EUR 672.00 EUR 1047.60 EUR 314.40 EUR	100ug 10ug 1MG 200ug 500ug 50ug
Human PSAT1 Antibody
32741-05111	AssayPro	150 ug	313.2 EUR
Human Alanine aminotransferase 1 (GPT)
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Human Alanine aminotransferase 1 (GPT)
1-CSB-YP009864HU	Cusabio	516.00 EUR 280.80 EUR 1809.60 EUR 770.40 EUR 1210.80 EUR 349.20 EUR	100ug 10ug 1MG 200ug 500ug 50ug
Phosphoserine antibody
70R-PR015	Fitzgerald	50 ug	289.2 EUR
Phosphoserine antibody
20C-CR1332RP	Fitzgerald	100 ug	159.6 EUR
Phosphoserine antibody
10R-7895	Fitzgerald	100 ug	386.4 EUR
Phosphoserine antibody
10R-P125a	Fitzgerald	250 ul	807.6 EUR
Phosphoserine Antibody
20-abx159643	Abbexa	326.40 EUR 276.00 EUR	100 ug 50 ug
Phosphoserine Antibody
20-abx134715	Abbexa	427.20 EUR 644.40 EUR 260.40 EUR	100 ul 200 ul 30 ul
Phosphoserine Antibody
abx020673-100ug	Abbexa	100 ug	1279.2 EUR
Phosphoserine Antibody
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PSAT1 Antibody
DF12132	Affbiotech	200ul	420 EUR
PSAT1 siRNA
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PSAT1 siRNA
20-abx930090	Abbexa	661.20 EUR 878.40 EUR	15 nmol 30 nmol
PSAT1 antibody
70R-19567	Fitzgerald	50 ul	522 EUR
PSAT1 antibody
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PSAT1 antibody
39118-100ul	SAB	100ul	302.4 EUR
PSAT1 antibody
22101-100ul	SAB	100ul	468 EUR
anti-PSAT1
YF-PA18664	Abfrontier	50 ug	435.6 EUR
anti-PSAT1
YF-PA26096	Abfrontier	50 ul	400.8 EUR
Human Alanine Aminotransferase (ALT, GPT) AssayMax ELISA Kit
EA3922-1	AssayPro	96 Well Plate	572.4 EUR
Recombinant Human Phosphoserine Phosphatase
7-04162	CHI Scientific	5µg	Ask for price
Recombinant Human Phosphoserine Phosphatase
7-04163	CHI Scientific	20µg	Ask for price
Recombinant Human Phosphoserine Phosphatase
7-04164	CHI Scientific	1mg	Ask for price
Human PSAT1 shRNA Plasmid
20-abx959306	Abbexa	961.20 EUR 1345.20 EUR	150 µg 300 µg
PSAT1 ELISA KIT\|Human
EF002097	Lifescience Market	96 Tests	826.8 EUR
PSAT1 Recombinant Protein (Human)
RP024823	ABM	100 ug	Ask for price
PSAT1 Recombinant Protein (Human)
RP024826	ABM	100 ug	Ask for price
PSAT1 Antibody, HRP conjugated
1-CSB-PA018838LB01HU	Cusabio	380.40 EUR 402.00 EUR	100ug 50ug

Die Zellen wurden in der log-Phase gezüchtet und dann entweder mit pCDH-CMV-EF1-copGFP (Vektor) oder pCDH-PSAT1 für 24 h transfiziert. Stabile Zelllinien wurden durch Massensortierung auf einem FACSAria-Durchflusszytometer (BD Biosciences, San Jose, CA, USA) basierend auf der Expression von GFP, das von dem lentiviralen Vektor 72 h nach der Transfektion getragen wird, gescreent.